ELISA试剂盒的操作方法——间接法
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1.用包被缓冲液将已知抗原稀释至1~10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃过夜;
2.次日洗涤3次;
3.加一定稀释的待检样品(未知)0.1ml于上述已包被之反应孔中,酶联ELISA试剂盒价格,置37℃孵育1小时,洗涤;
4.(同时做空白、阴性及阳性孔对照)于反应孔中,加入新鲜稀释的酶标第二(抗)0.1ml;
5.37℃孵育35-60分钟,洗涤;
6.然后用DDW洗涤。
其余步骤同“双夹心法”的4、5、6。
Elisa试剂盒的操作注意事项
洗刷是ELISA试剂盒操作过程中决议实验胜败的一个关键步骤。目的是除掉未结合的反响物,间断抗原抗体反响,除掉标本中与反响无关的成分、游离的酶标物以及反响过程中吸附于固相载体上的非特异性物质。
断定效果须运用Elisa试剂盒测读仪,比色法判读可选择单波长或双波长,根据反响液颜色的不同选用不同波长的滤光片,以空白孔校零测定反响孔的吸光度值。具有杰出的重复性。
Elisa试剂盒——Elisa实验常见问题及解决方案
不正常的标准曲线
1 错误的方法重悬标准品 加入正确量的溶液重悬标准品,重悬充分
2 标准品稀释错误 按照说明书要求稀释标准品
3 标准品污染 使用一次性的灭菌吸头, 标准品贮存于2-8 ℃
4 错误的倍比稀释步骤 按照说明书倍比稀释标准品
5 波长选择错误 TMB为底物和以OPD为底物的试剂盒均有使用,而 前者比色波长为450nm,后者为492nm。双波长比色分析优于单波长。
6 标准品混用 不同批号试剂勿混用
7 试剂盒在运输途中时间太长,山东酶联ELISA试剂盒,温度太高,标准品失活 尽量缩短运输时间,夏季应放冰块降温
8 ELISA未终止而直接检测450nm和620nm TMB显色需终止后检测,否则会出现620nm比450nm读数高的现象。(数值仍有梯度规律)
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