Elisa试剂盒的操作注意事项
洗刷是ELISA试剂盒操作过程中决议实验胜败的一个关键步骤。目的是除掉未结合的反响物,间断抗原抗体反响,除掉标本中与反响无关的成分、游离的酶标物以及反响过程中吸附于固相载体上的非特异性物质。
断定效果须运用Elisa试剂盒测读仪,比色法判读可选择单波长或双波长,根据反响液颜色的不同选用不同波长的滤光片,以空白孔校零测定反响孔的吸光度值。具有杰出的重复性。
Elisa试剂盒的注意事项
Elisa试剂盒是否灭活:加热可灭清中补体系统,氯霉素ELISA试剂盒公司,在较少数情况下(培养ES细胞,平滑肌细胞时)建议灭活,氯霉素ELISA试剂盒厂家,在培养其余细胞时不建议灭清。灭活非常容易产生沉淀,如必须灭活请按56℃,30 min,轻微摇晃原则操作,灭活温度高、时间长、摇晃不均都容易产生沉淀。
Elisa试剂盒培养基:无培养基在结果重复性、细胞体外分化方面有优势,但是,仍然是培养液中基本的添加物,尤其是在原代培养或细胞生长状态不良时,常常会先使用有的培养液进行培养,待细胞生长旺盛后再换成培养液。
ELISA试剂盒的操作方法——双夹心法
1.包被:用0.05MPH9.牰碳酸盐包被缓冲液将稀释至蛋白质含量为1~10μg/ml。在每个聚乙烯板的反应孔中加0.1ml,4℃ 过夜。次日,弃去孔内溶液,用洗涤缓冲液洗3次,每次3分钟。(简称洗涤,下同)。
2. 加样:加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中,氯霉素ELISA试剂盒哪家好,置37℃ 孵育1小时。然后洗涤。(同时做空白孔,阴性对照孔及阳性对照孔)。
3. 加酶标:于各反应孔中,加入新鲜稀释的酶标(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃ 孵育0.5~1小时,洗涤。
4. 加底物液显色:于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分钟。
5. 终止反应:于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。
6. 结果判定:可于白色背景上,直接用肉眼观察结果:反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或极浅,依据所呈颜色的深浅,宁夏回族自治氯霉素ELISA试剂盒,以“ ”、“-”号表示。也可测OD值:在ELISA检测仪上,于450nm(若以ABTS显色,则410nm)处,以空白对照孔调零后测各孔OD值,若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍,即为阳性。
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