Elisa试剂盒——Elisa实验常见问题及解决方案
显色淡，灵敏度偏低
1 试剂盒未充分平衡 试剂盒从2～8℃冰箱取出后打开盒盖，于室温平衡至少20分钟，确保所有试剂已平衡至室温（约25℃）
2 样品不适合做ELISA检测 样品一般选择培养上清、血浆。其他样品形式可能不适合做ELISA检测或者需要优化检测的条件（例如稀释液的成分）
3 酶标板在贮存或洗后拍干时过分干燥 防止板过于干燥
4 包被遭到破坏 操作温和，移液不能碰到孔底
5 样本和孵育条件不合适 按照说明书条件，国产ELISA试剂盒哪家好，建议孵育过程中全程振荡孵育。
6 洗涤浸泡时间过长 按照说明书操作。勿人为增加浸泡时间；
7 偶联HRP试剂污染 弃去试剂，重新配置
8 错误的稀释偶联HRP试剂 弃去试剂，重新配置
9 TMB底物孵育时间过短，因非人为因素影响，需要优化孵育时间 确定合适的孵育时间：人为判定-高浓度的标准品出现深蓝色；S4-5有淡蓝色；机器判定620 nm波长下测定OD值达到0.6-0.65
10 样本浓度过高或存在基质效应 建议做不同稀释倍数，确认样本稀释倍数。
11 滤光片设置有问题或者波长选择不对 确认仪器设置及选择正确的波长检测。
12 酶标板不适合做ELISA 不能使用细胞培养板，建议使用ELISA高吸附力板子。
Elisa试剂盒有哪些需要注意的？
1. 跟着病况的进展或由其他因素影响，某些在机体内的含量发作大幅动摇，因此有必要对标本进行预处理。间接法测定中，标本恰当稀释还可下降非特异性反响。
2. 加样一般运用加液器，国产ELISA试剂盒，在ELISA试剂盒中一般有4次加样：加标本、加酶结合物、加底物和加间断液。加标本时有必要每份标本运用一支移液器吸嘴，国产ELISA试剂盒多少钱，避免交叉污染。加酶结合物、底物和间断液时则不需更换吸嘴。
3.在成批手艺检测中，还应留神操作时差的影响。加样及混匀时间的差异，使抗原反响和酶促反响时间不一致，对竞争法及定量检测影响很大，不留神可能会导致过错效果或定量不准。
Elisa试剂盒技术原理
(1). 抗原或的固相化及抗原或的酶标记。
(2). 结合在固相载体表面a的抗原或仍保持其活性。
(3). 酶标记的抗原或既保留其活性，国产ELISA试剂盒供应商，又保留酶的活性。
(4). 受检标本与固相载体表面的抗原或起反应。再加入酶标记的抗原或，也通过反应而结合在固相载体上。
(5). 此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。
(6). 加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。测定方法具有很高的敏感度（pg-ng/ml水平），并且重复性好。以反应为基础，将抗原、的特异性反应与酶对底物的有效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术。
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